邻水县异麦芽酮糖
(三）酶法合成常用的酶制剂
第一节三氯蔗糖
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
一、甜味味觉的生理学基在生物进化过程中，从原虫开始的化趋性至腔肠动物的化学感，再到鱼类、 鸟类和哺乳动物，则分化为味感、嗅感和其他化学感，味觉遂成为动物择食的重 要手段。对于绝大多数生物来说，味觉成了它们觅取食物的天性之一，也成了它 们对外界分子识別的一种本领。诸如酸、苦味食物往往会遭到婴儿的拒绝，而甜 香食物抑)受欢迎。生物之所以能延续丨0亿年而未灭绝，实与这种天陚的分子识 別有关。当然，生物以味作为生存的自卫手段，是极有局限性的。作为高度文明 的人类，不但早已摆脱了这种局限，而且还能有意识地加以利用。例如，现有糖 梢之类的人工甜味剂，就是能给予人们甜的味觉而被选择为蔗糖甜味的替代品。
将50g橙皮素加到250mL10%的氢氧化钾溶液中，室温放置30min后用10%的 钯-碳催化剂（4g)催化氢化1.5h。原料可用粗制的或直接市购的橙皮素，但以 重结晶的为好。将混合物过滤，用盐酸调节至PH7.0后，将溶液用水稀释至 600mL,加人5mL36%的浓盐酸溶液，然后快速加热至沸腾，回流2.5-2*75h。混 合物中HDG (DI)和橙皮素二氢查耳酮的比例大约为1:1。油状的反应混合物冷 却后可用4xl00mL的醚抽提，蒸发后得橙皮素二氢查耳酮16g (熔点1981)。 提取余液（带有一定的油牲）罝于冰箱中可得到纯净的橙皮素二氢查耳 酮-D-葡萄糖苷（II) 10. 3g，再用31%的乙酸乙酯抽提水溶性滤液， 可得1.5gHDG。HDG的甲醇结晶体呈无色针状，熔点119 - 121T：。用a - L -鼠 李糖苷酶水解除去鼠李糖后得率更髙，但不太方便。
对不同内阻下场强对转化率和活细胞的影响作了研究（图5 -18)。细胞悬 浮液与1叫经Bgi fl酶切的pCLRE2混合后在电容25jjlF下进行电脉冲转化，电 脉冲后，细胞在30T添加了 lmol/L山梨糖醇的YPD培养基上培养6h。在场强 为3.75kV/cun和内阻80W1时得到最高的转化率，约为1400个转化体/jxg线性 pCLRE2。在3. 75和5. 0kV/cm和内阻6(X)、800或100011时转化率较高[图 5-18 (1)]0这些条件下细胞存活率为10%?40%，实际脉冲时间为11 ~ 17ms [图5-18 (2)]。当内阻200或400ft时，转化率低。
全基团保护法，是对蔗糖8个游离羟基全部进行保护，然后特定游离出4、 r、6'三个位置的羟基进行氣化。
第三步，分离6-甲基-3, 4-二氢-1, 2, 3-嗯噻嗪-4-酮-2，2-二
用高效甜味剂替代蔗糖时，大多数是在等甜度条件下进行替换。因此，特将 有关高效甜味剂的相对甜度数据汇总于表1 -4，供对比参考。
(三）甜菊苷的致龋齿特性有研究认为，甜叶菊的水或乙醇提取物能够抑制某些细菌的活性，诸如 Pseudomonns aerugmosa及Proteus vulgaris等。此外，人们还研究了甜菊苗?的抗菌 活性对减少牙齿龋变方面可能的作用。