乌达区纽甜
(四）质粒表达
4-氣-4-脱氧-a-D-吡喃半乳糖苷-1，4，6-三氣-1，4，6-三 脱氧-々-D-塔格呋喃糖苷的甜味是蔗糖（5%)的205倍，4-氣-4-脱氣 _a_D_P比喃半乳糖苷一1, 4, 6_三氣-1, 4，6_三脱氧_芦_0_果聚呋 喃糖苷是蔗糖（5%)甜度的2200倍，这两种三氣蔗糖衍生物甜度相差10 倍。分子结构不同之处主要在C-4’，可见C-4'上卤取代基及其立体化学结 构对甜味具有重要影响，见图3-57。4 -氣-4-脱氧-a-D-批喃半乳糖苷 -1, 6-二氣-4-卤代-1, 4，6-三脱氧-分-D-呋喃果聚糖的C-4'卤代 成分甜味递增顺序为：F>Cl>Br>I。C-f取代基对研究V -脱氧-4' _ 卤代蔗糖类似物结构和甜味之间关系相当重要。Hooft等人认为三氣蔗糖衍 生物甜味构象具有 =75° 和少c_2,_0 + c.,+5 =95。的特
0-CH3和受体侧链N-端第四个氨基酸残基形成的色散键，因此与〒氣蔗糖相 比，4’-0-甲基三氣蔗糖只是甜度发生适度降低。
(1)嗜热菌蛋白酶（Thmnolysin)丨sowa等人发现一种金属蛋白酶——嗜 热菌蛋1^1酶（EC3. 4.24.4)，可以催化侧链羧酸不带保护基团的Z - Asp和 PheOMe,合成阿斯巴甜前体A'’ -苄氧羰基-L -天冬氨酰-L -苯丙氨酸甲酯 (Z-ASp-PheOMe),见式（2-18〉。在所有关于酶法合成阿斯巴甜前体的报道 中，均采用嗜热菌蛋白酶催化。
由于TCR在水中的最大溶解度仅为15%，使得棉籽糖酶解法合成三氣蔗糖 在经济上受到限制。因此，必须首先找到一种合适的TCR溶剂，要求它既能较 大限度地溶解TCR，又能保证《-半乳糖苷酶的活力。
图6-6 糖精的水解产物
表2 -50所列的一系列L -天冬氨酰-D -丙氨酸酰胺化合物，要比L -冬 氨酰-D-丙氨酸酯化合物稳定得多。无环酰胺和环己基酰胺化合物[81] ~[83]的甜度仅是蔗糖的100倍左右。经过引人刚性分支“下面”基团的化合物[84]~ [91]的甜度得以明M提高。环己基环的C-2和C-6位上简单的甲基 取代，可使化合物的甜度增加6倍，通过对R基团的优选，最后选定2, 2, 4， 4-四甲基-加过《^-酰胺[88]作为新型二肽甜味剂加以开发。这种化合物具有 较好溶解性和比阿斯巴甜更稳定的特性，已被命名为阿力甜（参见本章第三节）。 相应的D -丝氨酸敗胺和0 -甲基-D -丝氨酸酰胺化合物的甜度均要低一些。但 令人奇怪的是，这一系列中的葑基酰胺[91]只有中等的甜度，而前述的L-天冬 UWi-L-甲基葑基丙二酸二酯在酯类系列化合物中具有最大的甜度。
用球形纤维素弱阴离子交换剂同定化GT-1对甜菊苷进行转化。研究发现， 固定化酶催化S苷的转化效率与游离酶相差不明显，重笈利用8次后活力下降较 少，说明固定化效果较好。该固定化系统的最优反应条件为55T，淀粉与甜菊 苷比例为1:1,振荡速率较大（200r/min)时可改善物质扩散，从而可增大
(3)]。不对称单元的四个异型二聚体中的两个亚基的相对位置几乎都是一 样的，这表明，堆积相互作用并不对Neoculin异型二聚体的总体结构起重要 影响。值得注意的是，结构中的环状区域不大，怛构象有明秘的区别，这表 明这些区域具有较髙的可变性。
在脉冲前，细胞经二硫苏糖醇（di丨hiothrehol，DTT)处理或在样品中加人载 体DNA都+能提高转化率。用标准醋酸锂程序（standard lithium acetate procedure) 将线性PCLRE2转化至CandUu utULs得到的转化率非常低，1网DNA的转 化体不到10个。