铁山港区阿斯巴甜
0.3g/L0以重组酵母GS115/PPIC9M/PPIC3.5kV为出发菌株，通过摇瓶水平发酵 条件优化，高甜度莫奈林的分泌表达量进一步由0.3g/L提髙到了 0.5g/L。在 30L发酵罐上采取分批补料的方式实现了重组酵母GS115/pP丨C9M/PPIC3. 5kV的 高密度发酵，高甜度萸奈林分泌表达量达2g/L。而且表达的髙甜度萸奈林分泌 到胞外，无需破碎细胞提取。诙方法提供了一条产量高、分离纯化简便、可低成 本大规模生产高甜度英奈林的新途径，为实现髙甜度莫奈林的产业化和vgb基因 在毕赤酵母髙密度发酵中的广泛应用萸定了基础。
0=0 0 + K0H ~? 0=C 0 + H,0
我国广西一带有将尺.suariwiVmts的叶子加工成甜茶 化学结构图 饮用的传统，当地居民还冇将植物叶子的水浸出液与米粉一起混合制作糕点。近 些年来，民间还使用这种甜茶治疗糖尿病、商血压和肥胖症等。大鼠口服Rubii- soside进行的急性毒理试验，测得其半数致死量大约为2.4g/kg。在亚急性 毒理试验中，以！!)《>剂虽的10%添入饲料中喂养大鼠60d，未发现明显的毒性或 副影响。然而Rubusoside的糖苷配基楚甜菊醇Steviol ( 13 -羟基异贝壳杉烯酸）， 经代谢活化的Steviol在体外试验时发现有诱变活性，值得注意。有关Steviol的’ 诱变性参见本章第-节的详细讨论。
果浆中的仙茅蛋白不能用水抽提，因此经反复水洗可去除大萤水溶性物质, 然后可以用O.5rnol/L NaCI提取，这样就能明显提高仙茅蛋白的纯化倍数。 0.5mOI/LNaCl提取的提取液无色有甜味，然后经硫酸铵分级，再经CM-Sepha- _柱分离，NaCI线性洗脱后主要成分对应一个尖峰，该峰组分有甜味。加硫 酸铵至约饱和度的80%，得到的沉淀在lOrmnol/L磷酸缓冲溶液中溶解，溶液进 行Sepha(丨exG-100柱凝胶过滤纯化。这样从30g果浆（湿取）可以得到5mg纯 仙茅蛋白（表5-19)，得到仙茅蛋白纯度很高，不溶于去离子水，溶于盐溶液 中，等电点7.1。
图3-19 4-PAS浓度对 6-PAS得率的影响
对脱酯化纽甜用伤寒杆菌做Ames检测（不论用或不用代谢活化），或者中 国仓鼠卵巢细胞黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶诱变检测，都没有发现纽甜的致 突变作用。体内和体外遗传毒理试验证实，纽甜和脱酯化纽甜都没有潜在的致突 变性或染色体畸变性。
选用正交表L,6 (44)安排试验，试验方案如表3-5所示。 表3-S 三苯甲基化和乙联化反应正交试賒
活力，包括手性分子之间巨大的甜度差异。
投人大工业生产最有效的途径仍是微生物发酵生产。近年来科学家们对真核 基W在原核中表达产物的功能进行了充分研究，认为有些基因产物尽管加工过程 不完善，只要给予合适的体外环境，它们可以重折叠成具备真核基因功能的三维 构象，从而恢复功能活性。因此选择合适的表达载体和摸索合适的体外条件去形 成有完全或部分活性的功能蛋白仍是一项有吸引力的工作。