云城区结晶果糖
现在，人们正努力研究以期分离出能引起上述反应的专一微生物。已发现很 多细菌具有分-葡糖犴酸酶的活性，能将甘草甜素水解成甘草亭酸。只有两种细 菌可将3 -脱氧-18 -卢-甘草亭酸还原成甘草亭酸或3 -表-18 -甘草亭酸。 从人的新鲜粪便中分离出的瘤符球歯属(Riimirwcoccus)具有水解甘草甜素生成 18 -P -甘草亭酸的功能，另外可将3 -脱氢-18 -甘草亭酸还原成对映体 3-表-18-0-甘草亭酸的梭状芽孢杆菌(Clostridium)也是从人刚排出的粪便 中分离出来的。这两种细菌的混合体能将甘草亭酸异构成3 -表-18 -办-甘草 亭酸，反过来也如此。这一过程可能是通过氧化中间体3-脱氢-18-/3-甘草 亭酸而进行的。甘草甜素转化成3-表-18-分-甘草亭酸是分几步进行的，其 中的终端异构物（isomer)是几种细菌的?种产物。所有变化可概括成：甘草甜
至今，对二肽结构与甜味之间的关系已有了较深程度的认识，发现T很多甜 度大于阿斯巴甜10 - 100倍的同型物。对甜二肽化合物优先存在的构象问题员然 有争议，但也开始为人们所认识。有些文献偶尔还提到甜二肽的稳定性及甜味特 性问题。即使如此，为寻求高效、稳定、甜刺激类似蔗槲的新型二肽甜味剂而进 行的研究仍会继续下去，它将推动着人类对二肽甜味剂理论和实践的进一步 认识。
新鲜的罗汉果不能食用，需经干燥处理。传统处理方法是将果壳青硬的罗汉 果采集后置于阴凉通风处摊晾，待皮色一半变黄时置于竹匾中送入特制烘炉中， 用木炭微温烘烤数日待外壳干硬、外皮呈褐色时为止。
冉排氨3.5h，得邻甲酰胺苯甲酸钠溶液 (简称酰胺化液〉。在酯化锅内将酰胺化 液降温后，加入冷冻的甲醇和次氣酸钠 溶液，在01下反应45min后升温至 30$，以淀粉碘化钾溶液测试呈无色反
表5-9 各转化体中嗦吗甜表达盒拷贝数（以切咖单拷贝gdhA基因为对照}
阿斯巴甜的溶解度是个重要参数，当应用于液体食品时更要考虑到这一点。 就阿斯巴甜本身，其溶解度是pH与温度的函数（图2-12和图2-13)。在配制
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
和蔗糖与糖精相比，二氢查耳酮的甜味来得太慢，消失得也慢，后味绵长， 有时带有类似甘草甜素和薄荷醇之类的苦后味，因此，它的甜味特性不太好。改 进的办法有两种：一种是对其分子结构进行改性；另一种方法是添加些味觉改良 剂或填充剂。据研究，改性分子丝氨酸，二氢查耳酮的甜味持续时间明显缩短， 而甜度基本不变[为蔗糖的（400 ±30)倍]。添加些办-葡萄糖酸内酯、氨基 酸和核苷酸也能缩短二氢查耳酮的甜味持续时间，提高其甜味质量。
当S -6 - a达到最大得率时，可通过DEAE -纤维素树脂除去果糖转移酶， 或通过热变性（65弋、lOmin)作用来终止反应。最后，S-6-a经高效液相色 语（固定相为Cl8柱，流动相为水）的分离提纯作用可以获得纯度大于85%的