岳池县糖精钠
这是英囯Tate & Lyle公司提出的新方法，首先利用芽孢杆菌属的菌株在 30弋下发酵Glc，生成葡萄糖G-6-a (葡萄糖-6-乙酰酯），采用甲醉抽提及 硅胶柱层析分离相结合的方法提纯，然后G-6-a与蔗糖的混合物，在由巨大 芽孢杆菌产生的果糖基转移酶的作用下，生成S-6-a，采用色谱分离的方 法，可分离出70%纯度的S-6-a。将之与Vilsmeier试剂反应对4、厂、6'三个 羟基进行选择性氣化后，再经脱乙酸基反应即得到终产物三氣蔗糖C
醚键娃相当稳定的，但强无机酸和其具有未共用电子对的氧原子形成徉盐， 使醚分子的C一O键变弱，因此在酸性试剂的作用下醚键会断裂。使醚键断裂的 最有效试剂为浓氢卤酸，浓氢碘酸的作用最强，在常温下就可使醚键断裂而生成 碘化烷与醉。但在过量氢碘酸存在下，所生成的醇进一步所应生成碘代烷。醚键 的断裂，一般是在含碳原子较少的烷基处断裂，但由于叔正碳离子较稳定且容易 生成，故醚键在一ch2hc (c6h5)3处断裂。
Absidia reflexa的cr -半乳糖苷酶催化棉子糖和RU的混合体系得到两种转半 乳糖昔产物：RGal-la和RGal-lb。表4-26所示为棉子糖浓度对4. 的 a-半乳糖苷酶催化转糖苷反应产物的影响。反应初始阶段主产物为KGal -lb， 然后有RGal - la。RGal - U和RGal - 1 b的产量随棉子糖浓度增加而增加。
(三）转化条件的优化
图1 -33 MNEI和Brazzein的内部（与受体接触的部分）和外部 (联雄与溶剂的部分）的静电势的比较
用来改善提取产物风味的酶处理法，除了通过酶重组法转变甜菊苷成味觉特 性更好的甜菊双糖A苷外，还可以使用适当的糖基转移酶将蔗糖分子中的Glc或 Fru单元转移至甜菊苷或其他类似物分子上。例如，利用月-果糖基转移酶 (分-呋喃果糖苷酶）在甜菊苷分子旁接上lmol的Fru,转变成果糖基甜菊苷 (FmctosylStevia),其甜味特性得以改良，向庶糖的甜味靠近。利用a -葡糖基 转移酶，在甜菊苷分子旁接上1 mo丨的Glc,转变成a-葡糖基甜菊苷（Glucosyl Stevia),可使甜味特性改良，甜度是蔗糖的100 ~200倍，替代蔗糖的比例由原 来的20% -25% ,提髙到50% ~60%。表4-5所示为经过葡糖基转移酶处理前 后甜叶菊提取物的成分变化情况。
七、利用棉籽糖水解法酶法生产三氯蔗糖
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
а,为此，人们希望利用菌株突变作用来解决这一困难。然而目前已筛选出的一 些具冇此种特性的杆菌突变菌种，仍具有蔗糖转化酶活力，而使用转化酶抑制剂 也没有取得满意的结果。