陇南市结晶果糖
以AmberlheXAD-7为载体通过戊二醛（最终浓度为12. 5%)交联制得 的固定化酶活力和稳定性都很高，其中Ambedite XAD-7是含疏水部位和亲水 部位的聚丙烯酸交联酯。固定在Amberlhe XAD-7的嗜热菌蛋白酶在40弋饱 和乙酸乙酯缓冲液中浸泡一周测定其稳定性：PH5?7时，固定化酶在载体中 很稳定，剩余相对活力约80% [阁2-25 (1)虛线]。饱和乙酸乙酯溶液中 的pH稳定曲线和在水溶液中的pH稳定曲线差别很大，尤其在酸性条件下。 在pH4时，乙酸乙酯饱和溶液中固定化酶的剩余活力约50%左右，在缓冲液 中活力完全消失
纽甜还具有其他一些突出性质，在一般的用量水平上可认为是一种无能量的 甜味剂，它可以与较广范围的食品及食品配料共同使用。例如，与阿斯巴甜不 同，纽甜不存在与还原糖或醛基风味物质发生相互作用的问题。它具有独特的风 味增强性质，且不会引起龋齿。
图1 -33 MNEI和Brazzein的内部（与受体接触的部分）和外部 (联雄与溶剂的部分）的静电势的比较
1965年偶然发现阿斯巴甜具有甜味之后，揭开了人类对二肽甜味剂的研究 序幕。阿斯巴甜在经历了长达15年的风风雨雨之后，终于在1981年得到美国的 批准使用。以阿斯巴甜为原型，人们研究了 1000多种与之相关的同型物，其中 不乏有实用价值和良好开发前景的甜味剂新产品。与此同时，还建立了甜二肽的 分子模型等基础理论。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
人体摄人某些蛋白质后会出现过敏性反应，特别是摄入了那些不能完全消化 吸收的蛋白质和多肽，为此，对嗦吗甜也进行了这方面的试验。经口摄取 lOOmg/d的嗦吗甜后，人体没出现任何与剂量有关的不良反应。用嗦吗甜溶液进 行穿刺试验（prick test)，也没发现任何过敏性反应。用猴子进行的皮下过敏性 试验，也没发现机体内有关嗦吗甜抗体的形成。
图1-丨3 D-氨基酸和L-氨基酸的构甩及其AH、B、X系统吡喃型和呋喃型糖分子环上的氧被亚甲基取代后的化合物称假糖 (Pseudosugar),如少-办-D -吡喃杲糖。这种假糖分子的构象与其相应的正常 糖分子相似，如必-/3-DL-吡喃葡萄糖（阁1 -14)。屮-a-DL-批喃半乳糖 和沙-卢-DL -吡喃果糖的甜度与它们母体糖的甜度相似。环上的氧对糖分子的 甜度没有多大影响。4甲棰吡喃糖苻、甲基呋喃糖苷和假糖的化学结构 (I)甲基-?-D-吡喃葡萄糖什 (2)甲基-彡-D-呋嘣果榭作 (3)屮-卢-D-吡蝻葡鈞铕 (4)甲基吡喃木溏作
糖精已有100多年的食用历史了，这也可用来判定它是否会引起人体致癌的 可能。约有20份关于这个方面的调杳表明糖精与人体癌症没有直接联系。
即使如此，就B前来说，人工合成甜味剂还是有很大的消费市场的。除上述 五条优点外，还有一个很重要的原因就是天然甜味剂受环境、生产季节、土壤和 病虫害等诸多因素的影响，成本势必较髙，有的化学性质还不够稳定，生产量也 受限制，在经济效益上尚无法与人工合成甜味剂相竞争。因此，除非法律上绝对 禁止使用，否则在今后很长一段时间内人工合成甜味剂将继续使用，且将得到不 断的发展。人们还会不断研究开发出更新、更好的产品，以满足这方面的巨大消 费市场。