卫辉市阿力甜
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
四、嗦吗甜的风味增强特性
(二）二氢查耳酮的溶解度与稳定性
关于阿斯巴甜中的天冬氨酸，上述领域的研究表明，经口摄取大剂摄的阿斯 巴甜溶液（34mg/kg),在禁食状态下的血浆天冬衩酸的浓度却没有变化，长期 食用[75mg/ (kg-d), 24周]也不会改变禁食状态下血浆的天冬氨酸浓度， 这可能是由于天冬氨酸在肠道上皮中的髙代谢率所致。因为天冬氨酸与其他氨基 酸的不同之处在于，它是经肠道上皮细胞所代谢，而不是通过肠门脉系统所吸
表1 -56 用环状同型物取代天冬氨酰的阿斯巴甜衍生
第三章蔥精衍生物
通过构建Neoculin的质子化和未被质子化的分子动力学模拟，他们研究了 酸碱度对Neoculin结构的影响力。图5-28 (1)和（2)所示为从模拟中获得的 Neoculin分别在被质子化（即中性条件下）和质子化了（即酸性条件下）的条件 下的典型结构u
甜菊苷是一种有中国特色的天然甜味剂，甜度是蔗糖的150?200倍。其最 大的问题在于甜味不正，带有明显的苦涩味，甜味刺激缓慢，味觉延绵。一般的 甜菊苷只有90% ~92%的纯度，由于成分的不确定性，导致难以进行良好生产 规范（GMP)。甜菊苷的后苦味使其应用受到限制，通过酶法改性，能够使其的 甜味特性得以改善。