表4 -23 不同来源的/?-半乳糖苷酶催化甜叶悬钩子苷的转糖苷反应产物
Sarroch Theerasilp等用Edrmm自动降解法对奇异果素的整个氨基酸序列进行 了测定。发现奇异果素氨基酸序列与其他甜蛋白序列没有明显的相似性，但与大 豆胰蛋白酶抑制剂A和C的氨基酸序列的相同比率分别为36.3% (从奇异果素 的氨基酸末端至60位氨基酸）、51.5% (奇异果素的143位至羧基末端）。这两 种蛋白均是分子质貴约为20000^的植物蛋白。
0.3g/L0以重组酵母GS115/PPIC9M/PPIC3.5kV为出发菌株，通过摇瓶水平发酵 条件优化，高甜度莫奈林的分泌表达量进一步由0.3g/L提髙到了 0.5g/L。在 30L发酵罐上采取分批补料的方式实现了重组酵母GS115/pP丨C9M/PPIC3. 5kV的 高密度发酵，高甜度萸奈林分泌表达量达2g/L。而且表达的髙甜度萸奈林分泌 到胞外，无需破碎细胞提取。诙方法提供了一条产量高、分离纯化简便、可低成 本大规模生产高甜度英奈林的新途径，为实现髙甜度莫奈林的产业化和vgb基因 在毕赤酵母髙密度发酵中的广泛应用萸定了基础。
理首先是3，3 - 二甲基丁醛的醛基与阿斯巴甜的末端活性氨基缩合生成亚胺， 再通过催化加氢，将亚胺的双键还原得到/V-[/V-(3, 3 二甲基丁基 天冬氨酰]-L-苯丙氣酸-1 -甲酿u选择丨H醇作为溶剂是因为中醉的极性比较 小，有利于反应的进行。加水搅拌和用水洗是为了除去反应中产生的一些极性比 纽甜大的副产物。
尔比，反应混合物的熔点都在60T以下。复配有机溶剂的加人能保证该酶反应 在37^的均相中进行有效的反应。图2 -67 N-苄氧羰基-L-天冬氨酸乙酯和D -丙氨酰胺 按不同比例混合对反应混合物熔点的影响 注：12%的水.9%的DMSO和18%的MEA为辅助因子。
到目前为止，仍未见有成功表达具有味进修饰活性的兎组Curculin的报道。 至于Neoculin, Ken - ichiro Nakajima等人已成功在九oryzae中实现胞外生产 Neoculin0将每一个NAS和NBS基因与含有一个带有三乙酸基氨模体的KEX2切 割位点的a -淀粉酶基因融合，所形成的两种表达质粒共转化为I oryzae NS4菌
人工合成甜味剂的优点，集中体现在以下几点：
①柚苷二氢查耳躬的为/>-羟笨基丙炔酸和P-羟苯基丙烯酸；
Fuganti和Grasselli提出，用/V -苯乙酰基作阿斯巴甜的保护基团，因为 W-苯乙酰基可以很容易用靑霉素脱乙酰酶除去。该生产工艺中，D- PheOMe经外消旋作用后可重复利用，幣个工艺流程简单，且底物回收也简 单，因此可操作性很强，但酶（嗜热菌蛋白酶的粗制品）的回收很难。 Tosoh公司的研究者提出，将产物抽提到非水溶性有机溶剂后，再从反应混 合物中回收酶，但该法酶和产物的回收效果均不令人满意，因此在工业上很 难行得通。
C-6位羟基的单基团保护是本制备法的核心步骤，要求所形成的中间产物 对氣化试剂稳定，而又易于脱除。其中，最适用的方法是酯类保护法，因为它兼 具引入方便、在所需反应条件下稳定以及易于除去等优点。通常选择羧酸的活泼 衍生物作为酯化试剂，其中最常用的是酰基酐或酰基卤。对蔗糖来说，形成乙酸 酯或其他羧酸酯娃最有效的保护醉羟基方法，这可以使它在随后的酸性条件中不 受影响。